伴随诊断新技术层出不穷：纵观国内外主流技术之间的对比

 收藏

关键词：诊断新技术伴随诊断

资讯来源：基因谷

发布时间： 2021-08-10

目前，伴随诊断领域所使用的技术类型主要包括聚合酶链式反应（PCR）、荧光原位杂交（FISH）、免疫组化（IHC）和高通量测序（NGS）等。截至发稿，国家药监局批准的肿瘤相关的伴随诊断试剂共19个，其中NGS方法10个，PCR方法4个，IHC方法4个，FISH方法1个。

NGS技术的原理是利用碱基互补配对原理，通过采集荧光标记信号或化学反应信号，实现碱基序列的解读。

NGS技术能从少量样本中得到整个基因组的全部信息，高通量、灵敏度高，因此适用于点突变、融合基因、基因扩增等所有变异类型的检测。但其成本较高，耗时较长，一般需要至少1周时间，对实验员技术和数据库要求高，相比于其它技术普及程度较低。高通量测序往往产生大量的数据，超出了临床实践中检测有限个位点突变的需求，因此高通量基因突变检测试剂盒厂商会采取手段对感兴趣的DNA片段进行富集，之后再进行高通量测序。此法可用于基因图谱、产前筛查等领域，适用范围广。

NGS技术的出现为肿瘤的易感基因检测、伴随诊断、个性化用药等提供了更佳的技术支撑。随着基因测序成本的进一步下降，一次性检测大量基因的费用将低于多次检测少数基因费用的总和，因此，NGS技术将会是伴随诊断的重点发展方向。

荧光PCR技术的原理是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，该技术是目前临床基因检测的首选方案。因其精确、快速、高灵敏度、简单且成本较低的优点，荧光PCR仪一次反应可以容纳96个或者384个样品，检测通量要高于FISH、IHC等技术。在除了NGS以外的技术中，荧光PCR也是检测DNA变异类型最多的方法。可检测的突变形式包括点突变、基因表达、基因扩增及基因融合。此外，荧光PCR技术还十分易于生产。其缺点也很明显，由于原理所限，荧光PCR法只能检测常见位点的突变，无法覆盖该基因的所有碱基，这可能导致忽略某些稀有的突变得到假阴性的结果，从而造成误判。该技术的应用领域主要在肿瘤、传染性疾病的早期诊断等方面。

FISH技术的原理是利用荧光标记的特异性核酸探针与细胞内相应的靶核酸分子杂交，通过荧光显微镜进行监测，并对染色体基因状态进行分析。目前只用于检测基因扩增和融合基因，结果可直接在显微镜下观察到，过程直观操作简单、特异性好、敏感度高，是产品数量仅次于荧光PCR的方法。这种方法的局限性在于只适用于检测单个基因片段的融合或扩增，并且需要较为专业的判读，操作要求也较高。此法目前主要应用在肿瘤分子诊断、病毒、基因图谱方面。