来源：NMPA

▲常州桐树生物科技有限公司的“微卫星不稳定（MSI）检测试剂盒（多重荧光PCR-毛细管电泳法）”获批上市（图源：NMPA）

1月29日，NMPA在其网上发布《2021年01月29日医疗器械批准证明文件（准产）待领取信息发布》。据悉，常州桐树生物科技有限公司（以下简称“桐树基因”）生产的“微卫星不稳定（MSI）检测试剂盒（多重荧光PCR-毛细管电泳法）”获批上市，注册证号：国械注准20213400070， 产品用于检测人“2B3D”（BAT-25、BAT-26、D5S346、D2S123、D17S250）微卫星位点状态。

值得一提的是，此次获批上市的产品是NMPA批准的首个微卫星不稳定（MSI）检测试剂盒。

微卫星不稳定（MSI）的诊断标准：PCR+毛细管电泳和 2B3D 位点是双重金标准

1、何为MSI？

微卫星是一种短串联重复序列，由于微卫星的重复序列在DNA复制过程中固有不稳定性。在正常细胞中DNA错配修复系统可以快速修正这种错误，但是肿瘤组织中常见错配修复基因缺陷，引起重复单位插入或缺失导致微卫星长度改变，从而表现为MSI，即微卫星不稳定性(microsatellite instablility)， 已有研究表明，MSI与肿瘤的发生密切相关。

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▲微卫星不稳定性示意图

2、金标准诊断方法：PCR+毛细管电泳法

目前公认的检测MSI的金标准是PCR+毛细管电泳法，此方法通过PCR 同时对同一个体来源的肿瘤组织和正常组织的微卫星位点进行扩增，再借助毛细管电泳对扩增产物进行DNA片段分析。比较肿瘤组织和正常组织的基因图谱，如果肿瘤组织的五指峰相较于正常组织发生了位移，则判定该微卫星位点不稳定。 

金标准诊断方法对样本的要求为：1）同一个患者提供的切片中需要包含肿瘤细胞和正常细胞（对照）；2）肿瘤组织切片和正常组织切片数量各 ≥ 5 片（未经IHC染色的FFPE切片），每片4-7μm 厚，切片需要做 H&E染色，肿瘤组织样本中肿瘤细胞含量不低于20%；3）用于检测的刮片区域需要至少1cm2，保存时间不超过2年。

3、国内外指南共识权威推荐检测位点：2B3D是通用标准

目前，基因组中已知的微卫星位点约为一千九百万个，因此，在MSI 诊断中，检测位点（Panel）的选择是关键，如果位点选择错误会导致假阳性或者假阴性率增高。1997年美国癌症中心（NCI）首次基于金标准方法对待检的微卫星位点选择进行了统一，即“NCI Panel”，包括5个微卫星位点，由2个单核苷酸位点（BAT-25和BAT-26）和3个双核苷酸位点（D2S123、D5S346 和 D17S250）组成，也被称作「2B3D NCI Panel」。

同时，也统一了该Panel的诊断标准：若这5个微卫星位点中有2个或2个以上的微卫星不稳定，则判定为微卫星高度不稳定（MSI-high，MSI-H）；若有1个微卫星不稳定，则判定为微卫星低度不稳定（MSI-low，MSI-L）；若5个微卫星位点均稳定，则为微卫星稳定（Microsatellite stable，MSS）。

直至目前，“2B3D NCI Panel”在国际范围内都是最权威的检测标准。《中国临床肿瘤学会（CSCO）结直肠癌诊疗指南 2020 版》、《结直肠癌分子标志物专家共识》（2018 版）、《遗传性结直肠癌临床诊治和家系管理中国专家共识》（2018 版）及《ESMO 共识：肿瘤免疫治疗中的微卫星不稳定检测建议及其与 PD-1/PD-L1 表达和肿瘤突变负荷的关系》（2019 版）等多个国内外指南和共识均明确推荐用“2B3D NCI Panel”进行MSI检测。

2002年，NCI对MSI检测的位点进行了补充，除了可以选“2B3D NCI Panel”之外，推荐了一个由5个单核苷酸微卫星位点组成的 Pentaplex Panel，包括BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-22、NR-24。除了上述两个Panel，Promega Panel也常用于MSI检测中，它也是由5个单核苷酸微卫星位点构成：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、MONO-27。

关于桐树基因

桐树基因成立于2016年11月，是一家专注于肿瘤基因诊断研发、生产、销售，以创新技术为驱动、多平台布局的高新技术企业。成立以来，公司业务量呈现出指数级增长，销售额已居同行业前列。同时，已经完成了上海研发总部、第三方医学检验所、GMP生产车间等多地域战略布局。

此前，桐树基因曾于成立之初获得宁波博颐的天使轮投资，于2018年获得复星医疗的A轮投资。2020年10月，顺利完成元生创投、朗玛峰创投、翕然资本、江苏拓邦等数亿元人民币B轮投资。

依靠多平台布局，协同发展的策略，桐树基因已经成长为国内肿瘤基因检测行业的佼佼者。据介绍，公司基于MASS-PCR技术平台的2款试剂盒正在同时进行临床试验。MASE-CE技术、NGS微量建库技术、CRIDIT-CRISPR等也已经推动到注册检验或临床研究阶段。此次“微卫星不稳定检测试剂盒（多重荧光PCR-毛细管电泳法）”成功获批上市，将确定公司在国内的领先地位。