【收藏分享】NGS产品设计开发常见问题解析（一）

来源：优咨康

1、企业参考品的构成

企业参考品分为阳性参考品，阴性参考品，检测限参考品，精密度参考品。

a. 阳性参考品，应当涵盖申报范围内所有位点，针对于大panel的试剂盒，可以根据产品的预期用途、临床意义以及基因类型等因素进行针对性和代表性的设计。

例如考虑显著临床意义基因，以及具有明确临床诊断意义的基因类型及基因型中不同的变异类型。可以设置不同的突变频率丰度并且不同的变异类型，并且要考虑代表性。

b. 阴性参考品 应当为经确认的无相应靶突变序列的DNA储存液。这里面存在两个考虑角度，一个是无任何突变序列的DNA储存液，一个是含有申报范围外的突变位点的DNA储存液。

c. 检测限参考品 检测限参考品的设置和确认方式可参考阳性参考品的设置和确认。

2. 企业参考品的来源

企业参考品的原料可以采用临床样本或细胞系提取的核酸储备液作为原料，突变形式及拷贝数需采用有效方法进行确认，并明确接受标准。确认的方法一般考虑金标准方法或已上市同类分型试剂。

3. 提取试剂以及分析软件不属于试剂盒内的组份，是否也需要配套研究和验证

a. 核酸提取试剂无论是否包含在申报产品中，都应对核酸提取环节进行充分的验证，包括核酸的完整性，核酸的提取效率，核酸的浓度，纯度等。并且明确样品质量（包括但不限于核酸浓度、纯度及完整性）的最低要求并进行质量控制。

4. 阳性判断值如何进行研究

建议采用受试者工作特征（ROC）曲线的方式对结果判断的临界值进行确认，同时还应考虑不同影响检测结果的因素，例如人群流行病学信息、疾病的类型、分期等。如果适用于不同样本类型，还需要注意不同样本类型的临界值是否相同，是否存在差异。

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